肝脏在代谢过程中涉及多个方面，包括葡萄糖的形成、胆汁分泌、蛋白质合成、解毒和尿素的形成。这些功能大部分是由肝脏的实质细胞(称为肝细胞)执行的，这些细胞已被广泛用于研究肝脏功能以及药物和毒物的代谢betway必威官方网站在体外．这些肝脏的各种功能或针对器官的疾病已被研究使用小学文化肝细胞。使用原代培养进行的研究的例子包括细胞色素P450和其他药物代谢酶的表达模式和功能，细胞毒性和药物-药物相互作用。因此，原代肝细胞培养是评估肝功能和疾病的重要工具。
使用两步胶原酶灌注分离肝细胞的方法可以追溯到1969年，由科学家Berry和Friend提出。该协议经过了几次修改，塞格伦1976年的协议得到了最广泛的遵循。这涉及到通过门静脉灌注胶原酶麻醉成年大鼠肝细胞的分离。用孔径为100 μm的网状尼龙过滤器对培养在平板上的细胞进行过滤。然后在4小时后用或不用血清培养基更换培养基。
一篇文章发表在可视化实验杂志2012年，Shen及其团队详细讨论了该方案，允许分离大量存活的肝细胞。产率为88 ~ 96%;而细胞产率为1.0 x 108每种制剂的细胞。
作者建议在原代肝细胞培养过程中要记住的几点包括:
- 严格无菌技术的使用对于任何细胞培养都是至关重要的;这样可以避免细菌或真菌病原体的污染。
- 灌注前门静脉后壁不得穿孔。
- 细胞间的粘附是由一种称为桥粒的结构介导的，也称为黄斑附着体。这种结构需要钙，因此，灌注使用钙2 + -在接下来的步骤中，通过胶原酶的作用，自由介质和EDTA螯合金属来分解细胞附件并隔离细胞。这是Ca2 +用富培养基使依赖钙的胶原酶起作用2 +让消化更有效。
- 肝细胞的制备需要正确的胶原酶处理。的推荐流量灌注缓冲液II加胶原酶25毫升/分钟。
- 肝细胞分离后即刻易碎，4小时后更换培养基应谨慎。由于直接的力量会破坏细胞，所以不要直接在细胞上方移液，而要沿着孔的一侧移液。
- 肝细胞培养不成功的检查要点:1)灌注速度低或缓冲加热不当，细胞游离不良。2)过多的胶原酶消化导致细胞死亡。
引用:
李斗勋和李光雄。肝细胞的分离、培养及其临床应用。汉阳医疗评论，2014; 34:165 - 172。沈璐，希勒布兰德，A.，王德强，刘敏(2012)。大鼠肝细胞的分离与原代培养。可视化实验杂志:朱庇特，(64)， 3917。doi: 10.3791/3917。