疾病特异性表型的研究可以用细胞系来完成。例如,产生诱导多能干细胞来表达帕金森病最常受影响的基因突变叫做富亮氨酸重复激酶-2(LRRK2).由Ngubetway必威官方网站yen领导的研究小组从患者的成纤维细胞中生成了类似于疾病早期阶段的神经元,从而可以对疾病建模和测试治疗药物进行研究。因此,来自患者的成纤维细胞可以进行多种研究,如疾病背后的机制和设计适当有效的治疗方法。
传统的分离成纤维细胞的方法使用酶,但存在一些挑战,如长时间的过程(长达4小时),过度消化的可能性和降低细胞活力。一篇betway必威官方网站发表于2013年的研究文章可视化实验杂志Vangipuram和团队讨论了从4毫米的人类皮肤活检组织中建立成纤维细胞培养。该方案没有酶处理,因此被描述为“技术上简单”,持续15-20分钟。当有少量少量的样本时,也发现它是可重复的(这是对老年患者或慢性病患者观察到的)。在收到活检样本后,该方案可以立即获得很高的成功,从而允许从患者身上提取的样本进行培养。
将800 μl全DMEM/20% FBS培养基加入明胶涂层的6孔板中。皮肤穿刺活检样本首先在培养基中制备,然后将其解剖成均匀大小的碎片。必须注意避免锯齿状边缘导致细胞生长不良或附着不良。然后将切片放在培养板底部进行孵育。每2天添加一次介质,以补充因蒸发而损失的物质。每天进行一次细胞监测,每2天更换一次培养基。
剥离48小时后,在7-10天内观察到角质形成细胞的生长和成纤维细胞的生长。与添加20%胎牛血清的DMEM高糖培养基相比,后者可促进角质形成细胞的生长。细胞显示成纤维细胞的形态:纺锤形细胞中有椭圆形核。培养物被发现表达一种名为SERPINH1(也称为HSP-47)的特定标记,该标记与胶原蛋白合成有关。
虽然建议20%的胎牛血清用于初始培养,10%的胎牛血清可用于细胞的后期传代。传代2次后可见角质形成细胞的稀释。由于角质形成细胞等其他细胞需要特定的生长因子和补品才能活跃生长,因此使用的培养基只能培养成纤维细胞。
因此,研究提betway必威官方网站出了更新和更简单的方法主要的文化纯成纤维细胞。这可以加速更多的研究,特别是针对人类疾病的研究。
引用:
- 阮,H. N,拜尔斯,B.,科德,B., Shcheglovitov, A., Byrne, J., Gujar, P.Pera, R. R.(2011)。LRRK2突变ipsc衍生的DA神经元显示对氧化应激的易感性增加。细胞干细胞,8(3), 267 - 280。doi: 10.1016 / j.stem.2011.01.013
- Vangipuram M., Ting, D., Kim, S., Diaz, R., &Schüle, B.(2013)。皮肤穿刺活检组织外植体培养衍生原代人成纤维细胞。可视化实验杂志:朱庇特, (77), e3779。doi: 10.3791/3779