用角膜原代培养物代替动物模型进行毒性试验

角膜的原代培养

构成角膜的几个组织从上皮到基底膜依次维持上皮。其次是间质中的角质细胞,产生用于修复的胶原蛋白和细胞外基质蛋白。一种叫做Descemet膜的内层,它允许涂在角膜上的药物通过下一层叫做房水。

根据研究betway必威官方网站先进给药综述根据乌尔蒂的说法,角膜成为药物进入眼腔的重要途径。因此,药物可能的毒性作用可以在角膜细胞中看到,因为它们暴露在药物中。

药物对眼睛可能产生的毒性作用是用动物模型来研究的。Draize测试就是一个例子。这涉及到给白化病兔的下结膜囊注射药物或化学试剂。眼睛的任何变化,如结膜发红、虹膜或虹膜炎、肿胀或水肿以及眼泪流出都被记录下来。该测试不仅使用了遭受不适或疼痛的动物,而且还考虑了观察结果是否主观或依赖于检查它们的人。另一个挑战是人类和兔子眼睛在生物解剖和生理上的差异。

用于评估生物分布在活的有机体内, Rönkkö和团队已报道药物传递和转化研究betway必威官方网站至少要牺牲20只动物(兔子)!这是指用至少5个时间点对2种药物进行比较,每个点需要2双眼睛。用于观察的图表是通过杀死动物生成的,因为采样不能是非侵入性的。

这就引入了在体外毒性评估方法。鉴于化妆品指令76/768/EEC禁止在欧盟使用动物来测试化妆品,这一点变得非常重要。另一项法律(指令63/2010/EU)着眼于取代、减少和改进用于研究的动物。betway必威官方网站

眼睛上的药物测试也使用过体外系统。例如,从牛源分离的角膜用于牛角膜混浊度和透气性(BCOP)测定。应用感兴趣的化合物后,效果可见一斑。这些测试不仅在几个小时内有效,而且它们也不代表人眼。

Rönkkö和团队(2016)报告了几项使用主要的文化角膜上皮细胞。这些研究范围从毒性研究到摄取研究和生长因子的影响。由于原代细胞不经过修饰,因此与角膜的表型相匹配在活的有机体内,它们可以被称为人类角膜上皮细胞的代表。

所研究的化学分子对原代培养的影响可以通过观察如发红或细胞迁移或肿胀的影响来评估。对细胞的毒性可以通过比色试验或发光测定细胞的活力来检查。释放的分子,如细胞因子或ATP对有毒分子的反应也可以测量。

例如,Geerling和团队建立主要的文化用无血清角质形成细胞培养基制备人角膜上皮细胞。文章发表在调查眼科学与视觉科学报道了用羟丙基甲基纤维素等泪液替代品、ATP和发光进行培养的测试。

除了发现可用于治疗药物的新分子外,研究还旨在减少动物实验的使用。betway必威官方网站原代培养接近在活的有机体内这些系统使它们适合于评估被测药物,从而为研究提供了宝贵的帮助。betway必威官方网站

引用:

眼药代动力学和给药的挑战和障碍。先进给药综述2006;58(11): 1131 - 5。

威尔逊SL, Ahearne M,霍普金森A.目前的技术对眼部毒性测试的概述。毒理学2015;327:32-46。

Rönkkö S, Vellonen K, Järvinen K等。用于药物毒性研究的人角膜细胞培养模型。药物交付和转化研究betway必威官方网站2016;6, 660 - 675。

葛林,丹尼尔斯JT, Dart JK, Cree IA, Khaw PT.天然泪液替代品在完全定义的人角膜上皮细胞培养模型中的毒性.调查眼科学与视觉科学2001;42(5): 948 - 56。

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