低温贮藏以细胞实验为基础的细胞培养过程已成为重点加强商业化和临床的重要步骤之一。在细胞培养中使用非优化的不合标准的方案和试剂会导致细胞损伤和降低细胞活力。此外，在细胞培养实践中缺乏优化的方案也可能导致细胞功能下降、批量变异、遗传变异和细胞亚群的表观遗传差异。在细胞培养过程中的冷冻保存过程中，主要关注的是冷冻和解冻技术。其次，适当的冷冻培养基制备方案对于保持冷冻保存细胞的活力也很重要。除此之外，细胞的解冻和复活涉及大量的良好实践和离心和介质更换技术的优化。
低温保存的常见失误
冷冻和解冻过程中的每一个步骤都可能导致一些愚蠢的错误，但如果处理得当，一个简单的修复可以让你的细胞培养更有效率。
处理:
只冷冻质量最好的细胞。在不良培养实践的基础上，需要记住的共同点是:细胞传代数高，细胞高度融合，存在微生物污染，培养物中残留DMSO或胰蛋白酶，细胞成球的严格离心，细胞再悬浮的严格移液等。在决定冷冻细胞之前，在细胞培养中避免所有这些错误，并始终记住在早期传代号冷冻细胞。
冻结:
在加入冷冻保存之前，应在4°C开始冷冻细胞，加入冷冻介质后立即开始冷冻。过早或过晚添加冷冻介质将再次导致细胞活力问题，因为不受欢迎的结冰、细胞过度脱水和随后的细胞死亡。此外，应选择合适的冷冻介质和细胞浓度，以保持保存后的最佳细胞活力。
储存:
只有当细胞被正确储存时，才能看到低温保存的积极好处，这包括知道你的细胞是需要储存在液氮罐的气相还是液相中。温度低于-130°C，以最佳地保护细胞活力培养。
解冻:
这一步的主要问题是解冻细胞太慢，让小瓶内容物在离心和去除冷冻保护剂之前升温。在达到室温之前，一定要确保用新鲜的生长介质稀释瓶中的内容物。
低温保存的关键先进挑战
细胞培养过程的发展已经开始影响低温保存技术的进步，这包括使用无血清(可能是化学定义的)介质作为无DMSO的冷冻介质。残留DMSO一直是细胞培养冷冻保存的挑战，因为它被证明对细胞有毒，因此，使用符合GMP的替代配方可能对细胞培养的潜在危害较小。DMSO在细胞培养中的主要问题是在细胞治疗的情况下，DMSO是治疗配方的一部分。
迄今为止，虽然已经有真诚的科学尝试取代DMSO，但它仍然是标准的方案，涉及较低的浓度(小于10%)和密集的洗涤步骤。一些科学家还研究了新的无dmso冷却方法betway必威官方网站玻璃化或纳米结晶．但迄今为止，基于DMSO的冷冻保存被认为是最具成本效益的，除了降低其浓度外，研究人员还建议在冷冻保存期间保持高细胞浓度，以减少治疗配方中的DMSO绝对体积。betway必威官方网站
此外，尽管在低温保存研究中，玻璃化和脱玻璃化的dmso替代讨论一直很流行，但这些在3D组织或类器官中的过程可能会对细胞造成损害，因此为了逃避晶体形成的问题，一些研究人员也在探索水凝胶系统作为低温保存的管道。betway必威官方网站
随着细胞培养过程变得越来越复杂，例如，用于药物测试的高通量筛选板，低温保存也变得越来越具有挑战性。有越来越多的机会使用低温保存的高通量筛选板药物筛选和药物毒性应用，但低温保存的挑战是保持这些板批次到批次的一致性。在这方面，使用一批冷冻保存的相同供体组织高筛选通量板是确保药物测试或筛选实验一致性的最佳方法。因此，改进这betway必威官方网站种技术的研究可能是增强细胞培养流的一个具有挑战性的未来努力。
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