“污染”这个词会让任何组织培养实验室的工作人员毛骨悚然!当在文献中搜索污染程度时,出现了以下观察结果:2012年发表在《betway必威官方网站细胞杂志Nikfarjam和Farzaneh的研究表明,平均而言,支原体存在于世界上5%到30%的细胞系中!专性寄生病毒通常对其宿主是特定的。引用一个病毒如何影响培养的例子是发表在《公共科学图书馆•综合》Uphoff和同事(2015)。577个人类细胞系中3.3%的小鼠白血病病毒(MLV)检测呈阳性。其中,活性病毒可以从其中17个细胞系中产生,如PCR所示!
污染导致细胞损失,因此,可能的产品更不用说时间,精力,试剂和金钱的损失!必威精装版App实验室的主要问题之一是未被检测到的污染!污染发生和检测之间的时间间隔最终会影响到所列的因素,包括声誉!
就支原体而言,实验室人员本身是主要的污染源。6.2%的M。salivarium病例都是因为在实验室里说话。这些重要部位的生物数量为106个/厘米2在头皮上;1毫升唾液中有107个生物,每厘米有105个生物2前额(Nikfarjam和Farzaneh, 2012)。这使得使用干净的实验室外套、口罩和手套成为绝对必须的。说话是一个严格的禁忌,最好避免在感冒或过敏的情况下在实验室工作。
保持干净的初级培养的另一个重要方面是避免事故。根据康宁公司的John Ryan的说法,一个实验室工作人员使用了一个标记为“WI-38”的小瓶作为二倍体细胞系。培养后,它被发现是威斯康星38-一种烟草细胞系,也被标记为WI-38。尽管在问题升级之前,这种情况已经得到了纠正,但完全意识到标签并以完全的意识进行实验变得非常重要。
保持清洁的初级培养包括以下关键技巧:
- 正确使用首字母缩写词作为标签。每个员工都应该知道所使用的缩写词。
- 良好的记录;介质或试剂的方案应连同pH值、体积、批次和所做的任何处理一起写下来。如果已消毒,应贴上标签以避免混淆。
- 在繁忙的实验室中,可以使用单独的颜色编码系统,为每个工作人员提供不同的颜色。
- 在实验室里,冰柜和冰箱的冷却盘管需要定期吸尘。这样可以去除潜在的污染。
- 实验室中连续使用的细胞系应每3-4个月进行一次筛选。微生物培养方法是将细胞培养物添加到培养基中,观察细菌或支原体污染情况。使用荧光染料染色DNA或使用PCR或荧光原位杂交(FISH)进行检测。其他技术包括分析染色体,分析短串联重复序列(STR)或同工酶分析。一种或多种技术可以经常使用。
- 新的大量化学物质、培养基和血清应使用最精确的检测方法进行检查。
- 实验室水的纯度每年至少要检查一次。
当正确的无菌技术遵循良好的记录保存和实验室实践,污染可以减少到最低程度原代细胞培养可以不断产生,并用于研究人类生物学的复杂机制。
引用:
Nikfarjam, L., & Farzaneh, P.细胞培养中支原体污染的预防和检测。细胞杂志,13(4), 203-212(2012)。
厄夫,C. C.,兰格,S.,登克曼,S. A.,加里森。H, S, P.和德雷克斯勒,H. G.流行和特征的小鼠白血病病毒污染在人类细胞系。《公共科学图书馆•综合》10 (4): e0125622(2015)。
理解和管理细胞培养污染指南-康宁。
John Ryan,《理解和管理细胞培养污染》。技术简报-康宁生命科学。