内皮细胞(ECs)是体内物质交换的天然屏障和平台，被视为“看门人”。由于基因工程可以很容易地在老鼠身上进行，心血管疾病的研究通常在这种动物身上进行。小鼠肺内皮细胞原代培养(MLECs)是研究与内皮细胞损伤相关疾病的常用系统，如高血压、糖尿病、急性肺损伤和动脉粥样硬化。
王领导的一个团队在年发表了一项协议科学报告在不需要收集样本的情况下，从小鼠肺部分离出功能性ec。该系统使用CD31和CD102微珠进行胶原酶I消化和分选。为了成功分离细胞，建议以下几点:
- 胶原酶I应在无血清DMEM培养基中溶解，而不是在PBS中溶解以获得良好的生存能力。
- 细胞产量要求细胞从组织中正确分离。消化不足时，组织解离不够，而过度消化则降低细胞活力。当酶促消化与机械压力(如温和移液)相结合时，可以达到正确的平衡。
- 播种最好放在小体积的盘子里。当使用较大的盘子时，衰老速度更快，而当使用较小的盘子时，融合时间更长。
- 当使用新生或年轻小鼠时，由于增殖更快，EC产量较低。此外，当涉及冷冻和解冻循环时，细胞分裂降低。
- 由于ECs具有特化性和异质性，建议使用2种以上的抗体来确认细胞身份。
- 当涉及基因工程小鼠时，在分离前需要重新进行基因分型。这是因为耳标可能会掉落。
这些原代细胞培养ECs可以在许多方面帮助研究，betway必威官方网站如研究内皮细胞的功能，如炎症或血管生成。rna测序等新方法可以在培养细胞上进行，用于研究基因及其调控。这种生成的培养物可以用于敲除研究，从而阐明特定分子及其在疾病中的作用。
如今，CRISPR/Cas等技术的使用极大地促进了敲除基因的生成。一个例子是2014年发表在循环，讨论了肝激酶B1 (LKB1)敲除小鼠的生成。用小鼠肺ECs (MLECs)证实缺失，以显示该蛋白在内皮细胞上的作用。
与据《欧洲心脏杂志》报道，心血管疾病是导致发病率和死亡的第一大疾病，使用这种原代培养可以为了解疾病和设计合适的治疗方法提供见解。
引用:
王俊，牛宁，徐松，李志强。et al。一种分离小鼠肺内皮细胞的简单方法。科学报告9，1458 (2019) doi:10.1038/s41598-018-37130-4。
张,W。等．内皮细胞特异性肝激酶B1缺失导致小鼠内皮功能障碍和高血压在活的有机体内．循环29, 1428-1439(2014)。
Adam Timmis, Nick Townsend, Chris Gale, Rick Grobbee, Nikos Maniadakis, Marcus Flather, Elizabeth Wilkins, Lucy Wright, Rimke Vos, Jeroen Bax, Maxim Blum, Fausto Pinto, Panos Vardas, ESC科学文档组，欧洲心脏病学会:心血管疾病统计2017，欧洲心脏杂志，第39卷，第7期，2月14日