如果你是一名从事原代细胞培养的细胞培养研究人员，最难betway必威官方网站以接受的事情就是看着你的细胞培养皿和烧瓶被污染，或者即使在正确的培养基pH值和温度条件下进行适当的培养也不能增殖。看着那些粘附的细胞没有附着在烧瓶表面，知道你必须重复整个过程来维持你的细胞培养，开始你的细胞培养分析和其他实验，对任何研究人员来说都是相当繁重的。betway必威官方网站
这不仅浪费了相关研究人员的时间和精力，而且还浪费了大量的金钱和资源，如介质和其他试剂，这对一个财政紧张的研究实betway必威官方网站验室来说几乎是一场噩梦。因此，了解在实验室中进行的每一个细胞培养过程步骤的技巧和处理，以确保原代细胞的健康生长和维护是非常重要的。在这篇文章中，我们列出了一些在原代细胞培养过程中非常常见的故障排除步骤，以便您的细胞保持健康和生长良好。
1.细胞脱离低温保存后的护理
大多数研究betway必威官方网站人员认为低温保存后原代细胞处理的问题在于离心后培养基中残留的低温保存剂(DMSO)的数量，但其他问题也相当普遍。这些其他问题包括省略推荐的细胞播种密度和每个冷冻瓶或每个播种瓶的推荐培养基体积。此外，冷冻瓶中冷冻介质的数量也是一个相当大的问题。冷冻培养基中的DMSO可在冷冻瓶中按适当比例稀释后再取细胞进行冷冻保存。如果播种和培养基体积得到了照顾，那么就需要处理细胞和适当的解冻程序。
betway必威官方网站研究人员应该遵循并优化他们的解冻程序，以防止细胞损伤，这一步对于保持冷冻保存的原代细胞的活力非常重要。解冻后，离心从DMSO和培养基中分离细胞是重要的。应遵循推荐的离心规程，以防止对细胞的严重损伤。在离心后播种原代细胞后，始终记得在观察到细胞附着后更换培养基，以确保去除任何残留的DMSO。
2.使用特定培养基培养细胞
细胞喜欢它们的介质环境，如果没有适当的营养，主细胞可以非常坚决地不增殖并保持独立，从而给研究人员带来了困难。betway必威官方网站大多数细胞类型都有特定的培养基来促进其最佳生长，研究人员应该知道所需的营养物质，因为原代细胞可以适应特定的培养基，改变营养物质会导betway必威官方网站致细胞在镀膜时缺乏附着，增殖速度缓慢。例如，内皮细胞可以依赖于VEGF。因此，尝试切换到无vegf的培养基会导致细胞不能粘附或生长非常缓慢，研究人员应该在实验室培养每种类型的细胞之前对它们进行充分研究。betway必威官方网站
3.再冷冻和晚传代细胞
原代细胞不应被视为连续细胞系，可以进行几次传代。原代细胞可以生长到有限的传代数，并在适当的时候衰老。为了保持良好的细胞活力，原代细胞应在指定的保证倍数内使用，以防止损伤。通常建议冷冻保存早期传代细胞，以防储存原代细胞，因为后期传代细胞可能无法在不对这些细胞造成重大损害的情况下恢复。细胞的早期冷冻也可以确保一旦出现污染或增殖方面的问题，研究人员总是可以返回并从早期传代数开始培养，以防止细胞活力的丧失。betway必威官方网站
4.代培养原代细胞试剂
原代细胞在培养和传代过程中通常需要较低浓度的胰蛋白酶/EDTA配方来调节最佳增殖和活力。较高浓度的胰蛋白酶会导致原代细胞的损伤，因此研究人员应该关注如何为原代细胞维持最佳的培养基环境。betway必威官方网站此外，血清浓度也是最佳细胞培养实践的一个重要因素，一些培养物在无血清条件下生长得更好。
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