低温保存是细胞培养研究人员的一项强制性技术，因为它允许在低温保存阶段储存细胞和组织，以供未来培养。betway必威官方网站由于整个过程的管理方式和使用的材料，低温保存会影响研究效betway必威官方网站果。例如，如果细胞冻结得太快，就会由于冰晶的形成而发生膜损伤和细胞死亡。成功的低温保存策略需要对低温保护剂、储存容器、冷却速度等因素进行深思熟虑。作为必威体育客户端网站是否涉及原代细胞培养和干细胞培养，我们要求Shraddha Singh Gautam女士，Advancells Group实验室运营总监必威app首页，让她对细胞培养冷冻保存的一些常见问题有宝贵的见解。
- 选择冷冻瓶是至关重要的。何时选择内螺纹或外螺纹冷冻瓶?
这两种选择取决于研究人员的偏好。betway必威官方网站一些研究人betway必威官方网站员选择外部螺纹冷冻瓶，这可能有助于最大限度地减少污染。一些研究人betway必威官方网站员选择内螺纹冷冻瓶，因为它们更适合冷冻盒。对于使用betway必威官方网站自动化机械的研究人员，他们需要咨询仪器制造商。
- 绝缘纸板或聚苯乙烯泡沫箱可以用作冷冻室吗?
这些材料或自制的设备并不总是提供可控的均匀冷却，因此可能会影响细胞，在解冻时，小瓶之间存在严重的活力差异。
- 低温保存应用中有DMSO的替代品吗?
低温保护剂可分为细胞内低温保护剂和细胞外低温保护剂。胞内药物是可以穿透细胞膜的小分子。例如DMSO，甘油，乙二醇，丙二醇等。细胞外剂是添加到冷冻保护剂溶液中的大分子。例如蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素等。
- 有什么有效冷冻干细胞的技巧吗?
低温保存过程的成功取决于4个关键方面:
良好的细胞状况:干细胞在冷冻保存前应处于健康状态，传代2-3天后应进行冷冻。不要使用过度生长或过度融合的细胞，因为它们可能在解冻后表现出较差的生存能力。确保不存在细胞团块，否则会导致对细胞的低温保护效率低下。低温保存的典型密度为1-2 × 106个细胞/ml。
正确使用低温保护剂:DMSO是最常见的低温保护剂。通常，10% DMSO与FBS一起是冷冻介质中的最终浓度。为了提高效率，研究人员应该在实验当天使用新鲜制betway必威官方网站备的冷冻保护剂混合物。
控制冷冻速率:对于细胞，理想的冷却速率是-1°C /分钟。电子自动冷冻装置最适合控制冷却速率。
适当的低温储存:液态N2冰柜允许在-140°C至-180°C的气相温度下储存。使用气相存储极大地减少了泄漏或爆炸的可能性瓶在取出。
- 将-80℃储存的细胞直接转移到液氮中是否可以?
一般来说，可以直接将冷冻瓶从-80°C转移到-196°C进行长期存储，而不需要任何其他临时步骤。
- 由于COVID-19，一些实验室不得不迅速关闭，液氮存储也无法进行。我们期望细胞在-80度的存储中能维持多久?
如果细胞在-80°C下储存了几个月，那么复活后的存活率很低。
betway必威官方网站研究人员正在努力开发更好的方案，以提高在-80°C的长期低温保存。一些研究报道，在冷冻介质中加入10%的Ficoll 70可以将细胞在-80°C下的储存时间延长到一年左右，与液态N2储存相比，其活力和电镀效率相当。
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