主细胞模拟原始组织，因为它们直接从组织中分离出来，并在优化的培养基条件下进行培养。因此，原代细胞培养为研究正常细胞生理生化提供了良好的模型系统。有很多关于原代细胞和细胞系的文章，以了解哪一种能提高研究效果，但在原代细胞的情况下(例如药物研究)，研究结果更接近药物对正常身体生理的影响。betway必威官方网站原代细胞培养betway必威官方网站研究人员根据他们的研究需求，根据组织特异性、物种特异性和疾病特异性类别使用不同类型的原代细胞。但是为了更好地理解原代细胞培养，这里有五件关于原代细胞的事情需要了解。
*成长要求
原代细胞可以悬浮培养或贴壁培养。一些原代细胞的例子，像外周血细胞这样的细胞在悬浮状态下自然生长，没有表面附着。这些原代细胞生长到比可能的粘附条件的极限更高的密度。对于依赖于锚定的原代细胞类型，这些贴壁细胞需要一个表面才能在体外正常生长。粘附原代细胞大多在塑料容器中培养，但也可以在微载体上培养(涂有细胞外基质蛋白以增加粘附并提供生长和分化信号)。原代细胞的细胞培养基由含有生长因子和细胞因子补充物的基础培养基组成。原代细胞通常在37°C, 5% CO2(哺乳动物细胞)的条件下在细胞培养箱中生长和维持。培养条件因原代细胞类型的不同而有很大差异。原代细胞生长培养基的pH值、葡萄糖浓度、生长因子和营养成分各不相同，这取决于原代细胞类型。
在建立原代细胞培养过程中，必须在生长培养基中加入抗生素(可能包括庆大霉素、青霉素、链霉素和两性霉素B的混合物)，以限制来自宿主组织的污染。但是，不建议长期使用抗生素，因为一些试剂可能具有细胞毒性或在分泌物组分析过程中引起问题。
在分离后保持原代细胞的活力至关重要，因为它们在经过一定数量的传代后会衰老并停止分裂。对于原代细胞的长期生存，良好的原代细胞培养处理技能以及无菌培养技术和合适的培养条件是必不可少的。
*细胞汇流
原代细胞融合通常是指细胞在细胞培养瓶或培养皿中所占的百分比。100%的原代细胞融合意味着培养容器的表面完全被细胞覆盖，而50%的原代细胞融合意味着一半的表面被覆盖。原代细胞永远不会生长到100%合拢，因为衰老的机会增加，导致细胞损失增加。汇流极限是决定继代培养周期和继代培养后细胞健康的主要因素。
*维护和亚文化
原代细胞培养维持阶段开始于分离细胞附着在培养皿或烧瓶表面后。通常，细胞附着在原代培养开始后大约需要12-24小时。当细胞达到所需的汇合点并积极增殖时，传代过程是下一步。不要让细胞达到100%融合，因为融合后的细胞可能会分化并表现出较慢的增殖。
贴壁原代细胞单层生长，需要用适当的培养基定期传代培养以保持指数级生长。继代培养包括使用蛋白酶/EDTA等蛋白水解酶破坏细胞间和细胞内的键。细胞附着解离，单细胞悬浮后，原代细胞计数，稀释至适当浓度后转移到新鲜培养容器中生长。
*单元格计数
血细胞计通常用于原代细胞计数和细胞活力测定使用排除染料台盼蓝。有关细胞计数的信息，请查看https://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/biology/cell-quantification.html．就原代细胞而言，尽管计数细胞的方法简单，被认为是通用的金标准，但在实验室研究人员之间很难实现一致性，因为它基于传代过程的处理而变得主观。betway必威官方网站
*低温保存和恢复
对于原代细胞，使用低温保护剂(如DMSO或甘油)实现低温保存。一般情况下，在80%完整生长培养基中添加10% FBS和10% DMSO即可实现低温保存。冷冻速度必须缓慢，每分钟-1°C，以尽量减少细胞内冰晶的形成。最后，样品需要保存在液氮(-196°C)的气相中。应采取预防措施，避免在解冻后立即对原代细胞进行离心，因为它们在恢复阶段对损伤极其敏感。
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